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Invivogen抗污染抗生素常见问题

2021-06-10
浏览次数: 18

Ø抗污染抗生素

细胞培养过程中如何避免细胞污染?

进行细胞培养时确保处于无菌环境,并使用恰当的灭菌技术。

细胞培养过程中所使用的培养基或添加的培养物均要确保无菌无污染。

定期使用显微镜或检测试剂盒监测细胞培养基,以确保无微生物污染。

使用抗污染抗生素。在原代细胞培养或克隆过程中微生物污染是难以发现的,Invivogen公司为此设计了具有预防功能的防污染试剂。Invivogen公司可提供的抗污染抗生素有Plasmocin™ prophylacticNormocin™, Primocin™ 及Fungin™


如何鉴别细胞培养过程中被哪种微生物污染?

如果细胞培养过程中存在细菌和/或真菌污染,可以使用光学显微镜进行鉴别。因为它们的生长速度很快,可以使细胞培养基出现浑浊或菌斑,一般48小时后即可用肉眼检测。随后可使用检测试剂盒对这些微生物种类进行鉴定。然而,支原体污染不能直接用肉眼观察,也不能通过光学显微镜进行鉴别,只能通过特有的分析方法(如支原体检测试剂盒)进行检测。因此,在细胞培养过程中支原体污染很容易被忽视。Invivogen提供的PlasmoTest™支原体污染检测试剂盒结果可靠,分析准确,尤其是可以排除假阳性或不确定的结果。


针对不同微生物的污染,应如何选择Invivogen的抗污染抗生素?

应用

产品名称

支原体

细菌

酵母

真菌

规格

产品货号

预防

Plasmocin™ prophylactic

*



25mg(10×1 ml)

ant-mpp

Normocin™

500 mg(10×1 ml)

ant-nr-1

Primocin™

500 mg(10×1 ml)

ant-pm-1

Fungin™



75 mg(5×1.5 ml vails)

ant-fn-1

检测

PlasmoTest™



1 kit(250 samples)

rep-pt1

清除

Plasmocin™ Treatment

*



500 mg(2×1 ml)

ant-mpt

Plasmocure™

*



100 mg(1 ml)

ant-pc

Normocure™




100 mg(2×1 ml)

ant-noc

Fungin™



75 mg(5×1.5 ml vails)

ant-fn-1



在冻存细胞之前的细胞培养过程中,可以添加抗污染抗生素吗?

可以的,在冻存细胞之前可以添加Plasmocin™ prophylactic(预防支原体污染试剂)或广谱抗生素Normocin™。但是,在这之前需使用光学显微镜鉴定细胞是否被细菌或真菌污染,或使用PlasmoTest™支原体检测试剂盒检测是否存在支原体污染。


Invivogen是否可以提供一种可以同时抵抗细菌、真菌、支原体污染的抗生素吗?

Normocin™和Primocin™这两款抗生素是广谱性的,可同时抵御细菌、真菌、支原体的污染。两者的区别是Primocin™推荐用于原代细胞培养中预防微生物的污染,而Normocin™则推荐用于细胞系培养。


在细胞培养过程中可以同时使用Invivogen的抗污染抗生素及基因筛选抗生素吗?抗污染抗生素会影响基因筛选抗生素的作用效果吗?

在细胞培养过程中可同时使用Invivogen的抗污染抗生素及基因筛选抗生素,抗污染抗生素的使用不会干扰常用的基因筛选抗生素的作用效果,例如G418, Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B和 Zeocin™。


Ø细菌污染

细胞培养过程中应如何鉴别细菌污染?

由于细菌比真核细胞小很多,因此在细菌污染的早期阶段通常被认为是细胞碎片。这个时候应使用放大倍数为100×-400×的光学显微镜观察细胞培养基的状态。如果观察到黑色斑点、杆状物或螺旋状物,那培养基应该是被细菌污染了。由于细菌生长快速,在污染后的48小时内便可引起培养基的变化,使培养基变浑浊。若培养基中含有酚红,由于细菌的新陈代谢使培养基的pH下降,从而导致培养基的颜色迅速变为黄色。因此在细菌污染48小时之后,便可用肉眼直接观察。微生物污染后的细胞培养基应该弃去,但如果没有其他替代的培养基可用,则可使用Invivogen的Plasmocin™ Treatment, Normocure™或者 Plasmocure™污染物清除试剂。


当在细胞培养过程中不确定具体是哪种细菌污染细胞时,应该选择哪种抗污染抗生素?

当不确定细胞是被哪种细菌污染时,推荐使用对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有效,具有光谱抗性的Normocure™。目前的研究结果表明,Normocure™可有效预防细胞培养过程中的细菌污染,例如葡萄球菌、无色杆菌。


Ø真菌污染

细胞培养过程中应如何鉴别真菌污染?

由于真菌菌丝可用肉眼或光学显微镜观察,因此真菌污染细胞培养基之后可直接通过肉眼或者光学显微镜进行检测。酵母(30-10 um)是形态结构最小的真菌,在光学显微镜下便可被观察到。另外,真菌的生长繁殖会导致培养基中pH值增加,从而使含酚红的培养基呈粉色。在大量真菌污染物存在的情况下,菌落可能形成霉菌,漂浮在培养基表面。此时应立即丢弃培养基,以防孢子传播。


细胞培养过程中为预防或清除真菌污染,Fungin™可以与青霉素、链霉素(Pen-Strep)同时使用吗?

可以的,Fungin™可以与一般的抗生素如青霉素、链霉素一起使用。


Fungin™可以在麦康凯琼脂培养基(MacConkey Agar)和血平板培养基中使用吗? 

可以的,Fungin™可以在其他培养基,如麦康凯琼脂培养基(MacConkey Agar)和血平板培养基中使用。


已经使用Fungin™处理了7天,但不确定真菌污染是否已全部被清除,对于这个问题有什么建议吗?

Invivogen建议将培养基分成两份,一份继续使用Fungin™继续处理3-4天,另外一份中加入无Fungin™或青霉素-链霉素的新鲜培养基,之后取1 mL至沙氏葡萄糖琼脂培养基中,将培养皿置于20-25℃ 3-5天。此方法可以帮您确认培养基中的真菌污染物是否已全部被清除。


推荐使用什么浓度的Fungin™处理细胞?

说明书中推荐使用50 ug/mL的Fungin™处理细胞,但Invivogen建议同时做75 ug/mL的平行处理组,以估计去除真菌污染的最佳使用剂量。处理时间应持续5-10天。


Ø支原体污染

如何使用Invivogen的支原体检测试剂盒Plasmo TestTM检测支原体?

PlasmoTest™支原体检测试剂盒是一种基于细胞的比色分析方法,利用Toll样受体II可以识别支原体成分(脂肽)的能力,诱导信号级联反应,导致NF-κB和其他转录因子的激活。在支原体存在的情况下,HEK-Blue™-2细胞表面表达的TLR2会激活这些转录因子,进而诱导分泌sAP(分泌性碱性磷酸酶)报告蛋白,可在16 - 24小时内被HEK-Blue™检测培养基检测到。


Invivogen的支原体检测试剂盒Plasmo TestTM只能检测活的支原体吗?

PlasmoTest™支原体检测试剂盒是通过检测支原体脂蛋白来判断是否有支原体存在的,因此其既可以检测细胞培养基中存在的活的支原体,也可以检测死的支原体。

另外,Invivogen的PlasmoTest™支原体检测试剂盒不仅可以检测支原体的脂蛋白,也可以检测细菌的脂蛋白。但是由于细菌污染可直接通过观察细胞培养基的状态进行鉴定,因此,当PlasmoTest™检测试剂盒结果呈现阳性,且细胞培养基无浑浊、颜色无变化时,可以断定培养基受到了支原体污染。


Invivogen的支原体检测试剂盒Plasmo TestTM与其他支原体检测试剂盒相比,有什么优势吗?

PlasmoTestTM是首款基于细胞分析原理检测细胞培养基中支原体污染的试剂盒,操作者只需具有基本的细胞培养的知识即可进行操作。试剂盒在过夜孵育之后,一小时之内即可获得检测结果。以往常用的支原体检测方法是PCR,但这种检测方法具有明显的缺陷,例如假阴性结果且能够检测的支原体种类受引物限制,无法对全部支原体进行检测。最重要的是,Plasmo TestTM检测结果呈阳性时,即表明细胞培养基中存在支原体污染物,因此不会出现假阳性结果。


在细胞培养过程中使用哪种试剂来预防支原体污染?使用那种试剂清除已污染的支原体?

● Plasmocin™ prophylactic(支原体预防试剂)是专门用于预防支原体污染的,它含有两种有效的杀菌成分,作用于蛋白质合成和DNA复制。

● Plasmocin™ treatment(支原体清除试剂),可在2 - 3周内快速有效地消除支原体污染。如果2-3周之后使用Plasmocin™支原体清除试剂之后无法有效清除支原体污染,或支原体对Plasmocin™产生了耐药性,可使用● Plasmocure™。Plasmocin™ treatment和Plasmocure™均是由两种不同抗生素混合而成,通过不同的机制发挥作用,可使支原体在2 - 3周内彻底清除。


在细胞培养时,可以直接使用Plasmocure™代替Plasmocin™ treatment清除已污染的支原体吗?

Plasmocin™ treatment和 Plasmocure™均是混合抗生素,用于清除已污染支原体。然而,Invivogen推荐只有在支原体对Plasmocin™ treatment产生抗性的情况下才可使用Plasmocure™。


如果支原体对Plasmocure™、Plasmocin™ treatment均已产生抗性,应该怎么办呢?

如果使用Plasmocure™、Plasmocin™ treatment均无法有效清除细胞中的支原体污染物,则表明样本中的支原体污染非常严重。这种情况下最好的办法是在下一次传代时尽可能稀释您的细胞,以此来稀释细胞中的支原体污染物。之后使用不同浓度(确保对细胞不会有太大毒性的浓度)的Plasmocure™再次处理细胞2周,例如使用工作浓度为50 ug/mL和100 ug/mL的Plasmocure™处理细胞。处理2周之后,将细胞分成两份,一份使用Plasmocure™继续处理一周,另一份不添加任何抗生素,3天后使用PlasmoTest™支原体检测试剂盒检测污染情况,以避免出现假阴性结果。如果您的细胞仍存在支原体污染,请重复以上步骤。

以上的操作步骤可有效清除90%的支原体污染,若您样本中的支原体污染物未得到有效清除,请及时联系我们。


Plasmocin™ treatment支原体清除试剂对细胞内的支原体污染有效吗?

Plasmocin™ treatment对胞内、胞外的支原体污染均有效。


我通常在T25细胞培养瓶中清除支原体污染,如果换用6孔板的话,清除效果会更好吗?

在T25细胞培养瓶中清除支原体污染物是合适的。当细胞的汇合度在60-70%及处于传代时期时,支原体的清除效果最佳,因为这可以确保不断去除支原体及添加新鲜的Plasmocin™ treatment或 Plasmocure™支原体清除试剂。


使用Plasmocin™ treatment处理细胞之后,取细胞培养上清进行PCR检测,结果显示支原体污染呈阴性,但几周之后细胞再次受到了支原体污染应如何处理?

非常抱歉,这种情况应该是使用Plasmocin™ treatment期间并未完全清除您样本中的支原体污染物。为防止这种情况再次发生,Invivogen建议在使用Plasmocin™ treatment处理2周之后,将细胞培养基分成两份。一份继续使用Plasmocin™ treatment继续处理1周,以防处理两周后细胞培养基中仍存在微量支原体污染物而发生再次污染的情况。另一份使用不含任何抗生素的培养基培养细胞,3天之后进行支原体检测,以检测使用Plasmocin™ treatment处理2周之后细胞培养基中的支原体残留量。


Plasmocin™ treatment是否适用于清除昆虫细胞内的支原体污染?

Plasmocin™ treatment适用于清除sf9细胞的内的支原体污染,因此应该同样适用于其他昆虫细胞,但是invivogen无将Plasmocin™ treatment用于昆虫细胞的案例及数据。


无菌污染-内毒素污染

什么是无菌污染?这会对细胞培养造成什么问题?

无菌污染物存在于无菌但仍有可能含有细菌成分的溶液和试剂中。内毒素也被称为脂多糖(LPS)或脂聚糖,是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。内毒素在体内、体外均是有效的验证诱导剂。内毒素污染是细胞培养和药物生产中的主要问题。因此,需格外注意无菌溶液和试剂的使用,检测细胞培养试剂中的内毒素水平是非常重要的。有关内毒素污染的更多信息,请查看细胞培养污染指南。


内毒素污染的常见来源有哪些?

内毒素的来源包括培养基、血清、水、缓冲液和其他细胞培养试剂,如胰蛋白酶。为了避免内毒素污染,我们建议要求制造商提供内毒素水平认证,或在使用这些试剂之前,使用Invivogen的HEK-BlueTM 脂多糖(LPS)检测试剂盒2进行内毒素水平检测。


Invivogen的 HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒如何检测脂多糖(LPS)?

HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2是一款基于细胞分析的比色试剂盒,专门用于检测具有生物活性的内毒素,可检测低至0.01 EU/mL的微量脂多糖(LPS),其检测原理是基于TLR4可识别革兰氏阴性菌结构上不同LPS的能力。微量(<0.01 EU/mL)脂多糖(LPS)的存在即可导致NF-κB的激活和分泌型碱性磷酸酶(SEAP)的产生。使用HEK-BlueTM进行检测时,NF-κB激活可以用肉眼观察或通过读取OD650进行定量。


您可以在以下文件中找到更多细节:细胞培养污染指南。

HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2总共可以进行多少次实验?

HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2提供了1 mL的QB试剂和1 mL的QB缓冲液,这足够制备100 mL的分泌型碱性磷酸酶检测试剂-QUANTI-Blue™溶液,可供大约供5个96孔板(480孔)进行分析。


HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2的敏感性如何?

HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2是高敏检测试剂盒,可以检测低至0.01 EU/mL的内毒素。


细胞培养过程中如果要使用HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2检测内毒素污染状况,是否可以使用胎牛血清培养细胞,如果可以,胎牛血清中的内毒素水平最高可为多少?

由于胎牛血清(FBS)中可能含有内毒素,因此其可能会影响HEK-Blue™-4细胞的功能,进而干扰实验结果。因此如果要使用胎牛血清(FBS),请务必保证无内毒素。因此,我们建议在购买胎牛血清(FBS)之前,请要求供应商提供内毒素水平的认证报告。


拆封之后,HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2的稳定性如何?

收到HEK-Blue™ 脂多糖(LPS)检测试剂盒2之后,应立即对其中的HEK-Blue™细胞系进行培养繁殖,以冻存细胞。由于细胞可以保存在液氮中,因此细胞没有有效期。至于试剂盒的其他部分,如果按照说明书中的要求正确储存于适当条件下,可稳定1年的时间。


在检测血液样本中的脂多糖(LPS)含量时,如何避免NF-κB激活因子对NF-κB反应的非特异性激活?

有两种方法可以避免NF-κB激活因子对NF-κB反应的非特异性激活:

使用HEK-Blue™ Null1亲本细胞系作为阴性对照。该细胞系只表达NFkB诱导系统(不表达负责LPS识别的TLR4受体),因此,HEK-Blue™ Null1细胞可以检测到任何非特异性的NFkB激活。

您可以使用Invivogen Ultrapure LPS-RS拮抗TLR4反应。如果使用该拮抗剂之后发现信号减弱,就可以确定样本是TLR4特异性激活。该拮抗剂的参考文献如下:LPS-RS ultrapure (#tlrl-prslps)


Ø Primocin™

Primocin™含有四环素吗?

不含,Primocin™不含四环素。


Primocin™用于预防支原体污染还是清除支原体污染?

PrimocinTM是一种预防性抗生素,对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌以及支原体和真菌均有效。PrimocinTM不能用于清除已经污染的细胞中的微生物。


应如何储存 Primocin™

Primocin™在室温运输。收到后可在4℃保存3个月,也可在-20℃长期保存,避免反复冻融循环。

具体的有效期在产品标签上。产品拆封后可在-20°C保持稳定1年,期间需避免反复冻融循环。


Ø Normocin™

对于细胞培养来说, Normocin™抗生素是必须要使用的吗?

是的,Normocin™是常用的抗污染抗生素之一,Invivogen所有的细胞系都是用这种抗污染抗生素研发出来的,是实验室中细胞培养的常用抗生素。


Normocin™可以用于杂交瘤细胞培养吗?

是的,Normocin™可以用于杂交瘤细胞培养。


应如何储存Normocin™?

Normocin™在室温运输。收到后可在4℃保存3个月,也可在-20℃长期保存,避免反复冻融循环。

具体的有效期在产品标签上。

产品拆封后可在-20°C保持稳定1年,期间需避免反复冻融循环。在4℃无菌条件下可稳定3个月。


预防性抗生素Normocin™和Plasmocin™的区别是什么?

Normocin™预防性抗生素是对支原体、细菌、真菌均有生物活性,而Plasmocin™预防性抗生素只是特异性预防支原体污染。


细胞培养过程中需要一种广谱性的抗污染抗生素,但是由于实验的特殊性,要求抗生素中不含酚红。请问Normocin™是否含有酚红?如有有的话,是否还有其他可替代的符合我们实验要求的产品?

Normocin™抗生素中含有酚红。如果如果您不能使用含有酚红的添加剂,并且希望使用广谱抗生素/抗真菌/抗支原体药物,您可以使用PrimocinTM作为替代。


Ø NormocureTM

应如何储存NormocureTM?

NormocureTM在室温运输。收到后可在4℃保存3个月,也可在-20℃长期保存,避免反复冻融循环。

具体的有效期在产品标签上。

产品拆封后可在-20°C保持稳定1年,期间需避免反复冻融循环。


Normocure™是否可以清除包括革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌在内的所有细菌污染?

是的,Normocure™是一种针对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的高效广谱抗污染抗生素。像环境中的葡萄球菌和无色杆菌对细胞培养基造成的污染均可有效被Normocure™清除。


PlasmocinTM Treatment(支原体清除试剂)

当溶解2瓶相同批次的支原体清除试剂时,一瓶澄清透明,而另一瓶有沉淀,且37℃加热或超声处理后,沉淀并未溶解,请问这是正常的吗?为什么会出现这种现象?

沉淀物是冻融之后PlasmocinTM Treatment中两种抗生素之一。因为抗生素在所提供浓度下的溶解度是有限的,因此冻融会使得抗生素在溶液中析出。出现这种情况之后不推荐使用超声进行处理,建议将其置于37℃下加热30分钟至1小时,然后涡旋1-2分钟,这会使沉淀物重悬溶解。PlasmocinTM Treatment在37℃条件下可稳定一周的时间,因此无需担心37℃条件下加热1小时会影响PlasmocinTM Treatment的稳定性及作用效果。另外,您也可以使用无菌水对产品进行1:1稀释。


当使用支原体清除试剂处理细胞时,培养基中是否可以含有庆大霉素或抗真菌试剂?

Invivogen不推荐将PlasmocinTM Treatment和其他抗生素,如庆大霉素及抗真菌试剂一起使用,因为这会影响它的活性。PlasmocinTM Treatment在特定浓度下和对某些类型的细胞会表现出一定的毒性,因此将PlasmocinTM Treatment和其他抗生素一起使用可能会使敏感的细胞系致死。


应如何储存支原体清除试剂?

PlasmocinTM Treatment在室温下运输。收到之后可在4℃稳定1个月,或在-20℃条件下储存更长时间,需注意避免重复冻融循环。

具体的有效期在产品标签上。

产品拆封后可在-20°C保持稳定1年,期间需避免反复冻融循环。


细胞已使用其他支原体去除试剂处理过,但未成功去除支原体污染,现在如果继续使用PlasmocinTM Treatment支原体清除试剂可行吗?

如果可以的话,强烈建议在未使用其他支原体清除试剂的新鲜细胞上使用PlasmocinTM Treatment支原体清除试剂,以确保细胞不会对PlasmocinTM Treatment支原体清除试剂中的任何一种抗生素产生耐药性。


Ø Plasmocure™

应如何储存Plasmocure™

Plasmocure™支原体清除试剂在室温下运输。收到之后可在4℃稳定1个月,或在-20℃条件下储存更长时间,需注意避免重复冻融循环。

具体的有效期在产品标签上。

产品拆封后可在-20°C保持稳定1年,期间需避免反复冻融循环。在100 mg/mL及无菌条件下,将其储存于4℃可稳定3个月的时间。


Ø Plasmocin™ Prophylactic(支原体预防试剂)

 Plasmocin™ Prophylactic支原体预防试剂的CAS号是多少?

 Plasmocin™ Prophylactic支原体预防试剂没有cas号,因为它是不同抗生素的混合物。


 Plasmocin™ Prophylactic支原体预防试剂中是否存在钙盐?

 Plasmocin™ Prophylactic支原体预防试剂中不含钙盐。


应如何储存 Plasmocin™ Prophylactic支原体预防试剂?

 Plasmocin™ Prophylactic支原体预防试剂在室温下运输,收到之后可在4℃下稳定储存一个月,要想稳定储存更长时间,请置于-20℃条件下储存,请避免反复冻融循环。

具体的有效期在产品标签上。

开封后,可在-20℃条件下稳定一年,期间需避免重复冻融循环。


Ø Fungin™

Fungin™含有两性霉素B吗?

Fungin™不含两性霉素B,与两性霉素B不同,Fungin™是一种高度稳定的化合物,它不需要溶解在有毒的脱氧胆酸盐中。


应如何储存Fungin™ ?

Fungin™ 在室温下运输,收到之后可在4℃下短期储存,要想稳定储存更长时间,请置于-20℃条件下储存,请避免反复冻融循环。

具体的有效期在产品标签上。

开封后,若在-20℃条件下,可稳定一年,期间需避免重复冻融循环。若在10 mg/mL的浓度下置于4℃无菌条件下,可稳定储存3个月。


Ø PlasmoTest™支原体检测试剂盒

PlasmoTest™支原体检测试剂盒可以检测细胞培养中的细菌污染吗?

PlasmoTest™支原体检测原理是基于TLR2的激活,因此它可以检测支原体和细菌污染。但是,支原体污染不能用肉眼检测到,而细菌污染中由于细胞的生长繁殖会导致培养基pH下降,进而导致培养基浑浊及颜色变化,因此可以结合肉眼观察培养基是否出现异常来判断培养基中是否存在支原体污染。


使用PlasmoTest™支原体试剂盒检测之后,应该在哪个波长下读取吸光值?

吸光值的读取可以在620 nm-655 nm波长范围内进行。根据我们对于QUANTI-Blue溶液的分析,对于无法满足620 nm-655 nm波长的读板仪,可以在600-680 nm波长区间内进行吸光值的读取。但是,这样得到的结果可能会存在低饱和度及高背景的问题。


当使用PlasmoTest™支原体试剂盒检测支原体污染时,应该使用多少细胞?

在收集上清液的同时收集细胞是很重要的,因为如果细胞内也存在支原体污染的话,可以同时检测到细胞内的支原体以及上清液中细胞外的支原体。


为什么使用PlasmoTest™支原体试剂盒检测支原体污染时,样本需要加热?

所有样本必须加热以去除上清液血清中可能存在的碱性磷酸酶,因为这可能会干扰检测结果。此外,加热步骤可以消除样本中残留的支原体,以避免污染扩散。


PlasmoTest™支原体试剂盒中提供的阳性对照和阴性对照分别是什么?

由于信息是专有的,所以非常抱歉不能透露任何与对照品相关的信息。但是请放心,阳性对照不是活的支原体。


当使用PlasmoTest™支原体试剂盒时得到了假阳性结果,是否是由于添加了二甲基亚砜(DMSO), 胎牛血清(FBS), 胰蛋白酶(Trypsin)或 PBS磷酸缓冲液影响了实验结果?

在研发PlasmoTest™支原体检测试剂盒时,我们已经证明某些胰蛋白酶和血清会诱导TLR2反应。高浓度DMSO(例如小于1/1000的稀释)的使用会对HEK-Blue™细胞产生毒性,进而导致背景值比较高。PBS缓冲液应该不会影响实验结果。建议单独测试培养基作为阴性对照,以免出现假阳性。


当使用PlasmoTest™试剂盒进行支原体检测时,包括阴性对照在内的所有孔均变为蓝色,该如何解释呢?

有3种可能的原因会导致所有的孔变为蓝色:

这可能是由于培养基中存在碱性磷酸酶(AP)。为了验证是否存在这种情况,可以进行一个非常简单的测试。只需在200µL的重悬HEK-Blue™检测试剂中添加50µL用于细胞培养的培养基(无细胞)。如果培养基变蓝,则是由于培养基血清中存在碱性磷酸酶(AP)。此时需加热培养基以去除碱性磷酸酶(AP)并重新进行相同的测试。放置相同的“测试”样本应得到阴性结果。

如果将培养基加入到HEK-Blue™检测试剂中无反应,则可能是由于HEK-Blue™ -2细胞受到污染导致所有的孔变为蓝色,此时最佳的选择是换用新的细胞。请注意,在此过程中最好使用滤嘴避免细胞污染。

还有可能是在测试之前对细胞处理不当导致所有孔变为蓝色。Invivogen提供以下建议以降低背景信号值,避免在刺激细胞之前NF-κB的激活,从而避免出现假阳性结果:

● 使用预热的PBS清洗细胞

● 使用热灭活的胎牛血清(FBS),有些胎牛血清(FBS)虽然无菌,但含有可能激活HEK-Blue™-2细胞的微生物碎片

● 在刺激细胞之前请勿离心

● 请勿使用胰蛋白酶


PlasmoTest™试剂盒中阳性对照和阴性对照的OD值在什么范围内是正常的?

阳性对照的OD630nm在0.9-1.2范围内是正常的,阴性对照的OD630nm需小于0.2.


不小心将要测试的上清液在室温下放置了2天,这会影响检测结果吗?

如果样本本身无菌且置于无菌的室温条件下是不会影响检测结果的。但是如果不能立即检测收集好的上清液,建议您置于-20℃冷冻储存。


当 HEK Blue™-2细胞开始生长汇合之后,推荐使用什么分流比进行分流。

分流比取决于细胞什么时候需要汇合。一般HEK-Blue™ 细胞的增值时间大概是24小时。因此,如果分流比为1:2时,细胞应该在第二天汇合。如果分流比为1:4,则细胞应该在两天后汇合。


在阳性对照及阴性对照试剂瓶中能够看到粉末状的试剂吗?

阳性对照是一种透明的脂质膜,通常很难用肉眼观察。而阴性对照是一种可见的粉末。


PlasmoTest™试剂盒可以检测血清、血浆样本吗?如果可以的话,哪种样本的检测结果会更好一些?

Invivogen只在PlasmoTestTM试剂盒中的HEK-BlueTM-2细胞上测试过几次血浆和血清样本。结果表明,与使用标准样品(在DMEM中)相比,血清样品的敏感性只有一个对数差异。例如,在血清中,我们可以加检测到高达10^4的UFC/ml发酵支原体,而在DMEM中,我们可以检测到10^3的UFC/ml发酵支原体。另一方面,我们发现DMEM和血浆样本之间存在3个对数差异。例如,在血浆中,支原体浓度高达10^6 UFC/ml才可被检测到,而在DMEM中,10^3 UFC/ml的支原体便可被检测到。因此,PlasmoTestTM试剂盒对血清样本的敏感性要高于血浆样本,更建议使用血清样本而非血浆样本。





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