Mirus Bio新上市转染试剂TransIT®-AAViator，基于逆向工程，最大化的提升AAV滴度及实心率！
腺相关病毒 (AAV) 是基因治疗中最广泛使用的传递/递转机制。近年来，基于AAV病毒所开发的基因疗法研发及临床试验注册数量也呈指数级增长，也需要AAV病毒生产工艺及产能的不断优化及扩展，从最早基于贴壁细胞工艺升级转换到以悬浮为主的200-2000L反应体系。
Mirus Bio成立于1996年，在核酸递送领域深耕多年，于2021年8月推出GMP级别TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂，支持AAV及LV从科研到GMP商业级别生产。不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物聚乙烯亚胺，PEI)，Mirus Bio将专利的多聚物及脂质技术进行多重组合，形成多功性的转染方案，克服细胞递转过程中的多重阻碍，以实现更高效转染和更低细胞毒性，从而大幅度提升多种血清型AAV病毒生产载量。去年7月底Mirus上市RevIT™ AAV Enhancer，已证明在不同AAV血清型别中，可提高AAV病毒基因组滴度1.2-4.9倍，并且在一定程度改善了实心率。更重要的是，RevIT™ AAV Enhancer不仅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂，也适配于其他转染试(如PEI)，使得AAV生产上游成本的进一步降低成为可能，降低了基因治疗单剂量成本。下图展示了国内客户前期测试反馈结果 ，测试包括了不同血清型别的质粒设计，适用于国内及国外品牌的转染试剂、细胞及培养基体系，允许1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。
随着国内外客户项目及管线进展，已有越来越多的客户将TransIT-VirusGEN® 转染试剂以及RevIT™ AAV Enhancer从摇瓶阶段线性放大至200L-500L反应器，并且已应用到处于临床申报产品中。ReciBioPharm 与Mirus Bio合作， Chris Brown(工艺流程开发部门)在线上(链接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer数据结果，并且比较了所有测试规模(摇瓶&反应器)，反馈病毒滴度放大效果非常好，并且实心率也保持相同水平，在 50 升的生物反应器中，也有着40%以上实心率。Chris Brown表示“选择用TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer产品，是基于我们以往的测试数据，允许最大限度地提高 AAV 产量。产量的提高，单个50 升生物反应器可生产更多剂量，从而降低单位剂量的成本。”
更多的，Bridgebio在poster中分享了基于AAV5型别，使用TransIT-VirusGEN® 转染试剂以及RevIT™ AAV Enhancer在摇瓶阶段线性放大至200L(125mL摇瓶→2L → 10L → 200L)病毒滴度和实心率数据结果(图左)。与之前工艺相比 (工艺A：PEIPro转染 + Expi293细胞/培养基)，替换成TransIT-VirusGEN® 转染试剂的工艺流程 (工艺B：TransIT-VirusGEN® 转染试剂 + Expi293细胞 + BalanCD培养基；工艺C：TransIT-VirusGEN® 转染试剂 + VP2.0细胞 + BalanCD培养基)，有着更高的病毒滴度(图右)及更低的宿主DNA和质粒DNA残留。
Mirus Bio 并没有止步于此，很高兴地宣布于2024年10月7日推出TransIT®-AAViator AAV转染试剂。继续沿用Mirus Bio 多聚物及脂质两组分的经典组合，不同的是应用逆向工程思维，基于现有RevIT™ AAV Enhancer，从Mirus Bio多聚物及脂质库中，分别筛选出更优化的脂质和聚合物配方。新推出的TransIT®-AAViator转染体系，进一步降低了 AAV工艺生产流程中所需质粒 DNA 和转染试剂使用量，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和实心率，从而提升 AAV生产工艺的总体生产效率。整合TransIT®-AAViator的AAV病毒上游生产工艺，无需通过细胞密度而调整试剂和质粒DNA加入量，并且实现了单个生物反应器的生产剂量的成倍增加，大幅度降低了单位剂量的成本，为基于AAV 病毒的基因治疗开发提供了更优的解决方案。
● 产品详情
产品名称: TransIT®- AAViator Transfection System
上市日期: 2024年10月7日
产品货号: MIR 73750 / MIR 73745
产品组分: TransIT®- AAViator转染试剂及RevIT™ AAV增强子
Mirus Bio AAV病毒生产相关转染试剂产品参数
* HDPE材质管/瓶
* 只针对30mL以及150mL规格试剂
** 只针对150mL规格试剂
TransIT-AAViator® 提升AAV生产效率&降低单剂量成本 | ● 生产剂量的成倍增加 随着AAV病毒滴度的提升，单个反应器所允许生产剂量也成倍的增加，从而大幅度降低单个剂量成本。 |
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● 减少生产所需批次 提高AAV病毒生产总产量，减少每次生产的所需批次数量或扩大生物反应器规模才可满足生产需求，缓解了由于产能不足等诸多限制。 | ● 减少质粒DNA用量 TransIT®-AAViator 转染系统，降低了至少一半质粒 DNA使用量 ，同时仍可保持高水平的滴度和实心率，进一步降低了批次生产成本。 |
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● 加快工艺开发进程 TransIT®-AAViator 转染系统，只需较少实验优化，即可获得最佳结果，从而缩短了工艺开发时间，加快了产品上市速度。 | |
● TransIT®-AAViator有着更高滴度和实心率
使用不同的质粒设计(GFP基因-上图；RPE65 基因-下图)，平行比较TransIT®-AAViator 转染系统与“Poly F”(Polyplus FectoVIR® 病毒转染试剂)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro®病毒转染试剂)。实验结果显示，在不同AAV血清型别中 (AAV5、8、9)，TransIT®-AAViator 转染系统有着更高的病毒滴度及实心率，当质粒设设计替换成治疗性基因(RPE65 基因)，病毒滴度及实心率相比于竞争品牌，其优势更加显著。
● TransIT®-AAViator降低质粒DNA用量
TransIT®-AAViator转染系统，允许较低质粒 DNA 加入量，仍可得到高水平AAV病毒滴度及实心率。
实验使用TransIT® -AAViator转染试剂(试剂:DNA比例为1.25:1,vol:wt)，以 1:1:1 的质粒质量比转染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三质粒。转染时加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），转染后 72 小时使用化学裂解法收获 AAV病毒。
● TransIT-AAViator实验流程
Step 1: 转染前，需保证生长在培养基中的悬浮HEK 293细胞有着>95%活力。
Step 2: 转染时：建议细胞密度建议为~3x10E6 cells/mL，TransIT®- AAViator 试剂与DNA 加入比例为1:1 - 1.5:1，每1mL培养基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5μl；静止条件下孵育15-45分钟，以便形成转染复合物，然后轻柔的加入细胞中。
Step 3: 转染后，无需更换培养基以去除转染复合物。一般可在转染后48-72小时收获AAV病毒。
客户案例分享
最新线上webinar：
Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (链接)
● 演讲者信息：
● Webinar内容一览：
通过该线上Webinar，可了解TransIT®-AAViator 转染系统，包括了开发初衷、数据性能对比及展示等。来自Affinia Therapeutics 高级工艺开发 Michael White， 强调了该转染系统的可扩展性和工作流程的易整合性，是想要优化上游工艺和增加整体成本效益的理想选择。
此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV转染平台体系纳入TransIT®-AAViator 转染系统经验，强调该系统能够降低质粒DNA用量，同时也在不同规模中进行了测试(摇瓶-3L反应器)，可稳定的保持高水平滴度，从而大幅度提高了生产工艺的效率，同时降低了AAV病毒生产成本。
● 讨论重点包括：
Affinia 比较了新一代转染系统TransIT®-AAViator与当前使用的平台工艺；
Affinia 在将TransIT-AAViator® 与其他试剂性能进行比较中，如何优化使其性能显著优于其他转染试剂；
整合TransIT®-AAViator转染系统，相比于优化前实现了3 倍滴度提升及 70% 实心率。
● 小结
新一代专为优化AAV 生产工艺而推出的转染试剂: TransIT®-AAViator 转染系统：
与基于单个组分(如PEI)转染试剂不同，可显著的提高不同AAV 血清型别的滴度及实心率；
有着更低转染试剂及质粒DNA使用量需求，同时保持高水平的AAV滴度及实心率；
相比于竞争品牌(FectoVIR&PEIpro等)，有着更高基因组滴度及实心率，并且质粒设计为治疗基因，其优势更加显著。
● 相关产品信息及链接
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| TransIT®-AAViator Transfection System | 2 x 1.5 ml | MIR 73750 |
| 1 × 30 ml | MIR 73745 | |
| RevIT™ AAV Enhancer | 1.5 ml | MIR 8000 |
| 10 x 1.5 ml | MIR 8006 | |
| 75 ml | MIR 8080 | |
| RevIT™ GMP AAV Enhancer | 200 ml | MIR 8200-GMP |
| VirusGEN® AAV转染试剂及RevIT™ AAV Enhancer | For 1L of Culture | MIR 8007 |
| For 10L of Culture | MIR 8008 | |
| TransIT-VirusGEN®转染试剂 | 0.3 ml | MIR 6703 |
| 0.75 ml | MIR 6704 | |
| 1.5 ml | MIR 6700 | |
| 5 x 1.5 ml | MIR 6705 | |
| 10 x 1.5 ml | MIR 6706 | |
| 30 ml | MIR 6720 | |
| TransIT-VirusGEN® GMP级别转染试剂 | 150 ml | MIR 6845-GMP |
| VirusGEN® AAV转染试剂(套装) | 1 kit for 1 L of cell culture | MIR 6750 |
| VirusGEN® GMP级别AAV转染试剂(套装) | 1 Kit - for 50 L of cell culture | MIR 6815-GMP |
| VirusGEN® LV转染试剂(套装) | 1 kit for 1 L of cell culture | MIR 6760 |
| VirusGEN® GMP级别LV转染试剂(套装) | 1 Kit - for 50 L of cell culture | MIR 6825-GMP |
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