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酶联免疫吸附检测（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一项很成熟的检测技术，通常在多孔板中进行，可用于定量检测靶分子。该技术适用于384孔板或其他高通量液体处理系统。夹心ELISA技术，可以提高直接ELISA的特异性，该技术是将捕获抗体而不是样品吸附到孔板上。通过适当地设计捕获抗体和检测抗体，使它们结合靶标的不同区域，提高检测的灵敏度和信噪比，但需要额外的试剂和步骤。在这种适应性强的系统中，通过改变捕获抗体或检测抗体，可以快速实现不同的实验需求。

Dusowa等人利用直接ELISA方法对源自胶质母细胞瘤细胞系的细胞外囊泡进行糖谱分析。他们证明，调节细胞外囊泡表面的多糖可增加树突状细胞的摄取量，而这是向免疫系统展示癌症抗原的重要的第一步 (Ref.18)。

对样品的多糖化进行分析，我们建议您使用凝集素作为检测的初始工具之一。

 精选文献 

• Screening protein glycosylation state (e.g., IVIG) (Ref. 3)

• Determining the glycans present on extracellular vesicles (Ref. 18)

• Utilized as a disease diagnostic or prognostic (Ref. 32)

 实验流程概览 (直接ELISA, 参考Refs.3 and 34) 

样本制备

• 用合适的结合缓冲液稀释样本，将稀释后的样品加入具有高蛋白吸附性能的ELISA板中，4℃孵育过夜；

• 用PBST（PBS plus Tween® 20）清洗板子，4次。

封闭

• 板子中加入Vectorlabs的CFB溶液(Carbo-Free™ Blocking，SP-5040-125)，室温孵育60分钟；

• PBST清洗板子，2次。

检测

• 加入生物素标记的凝集素，4°C或室温孵育60分钟；建议凝集素的初始工作浓度为0.5–10ug/ml。具体的孵育温度和凝集素的用量需用户进行优化；

• PBST清洗板子，4次。

显色

• 加入酶标记的链霉亲和素或亲和素继续孵育（具体条件根据相关产品的说明书进行）；

• PBST清洗板子，4次；

• 加入合适的酶底物显色。

读板

• 用合适的设备进行读值。

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