蛋白质印迹（Western Blot）保姆级教程 Part1：实验方案-深圳欣博盛生物科技有限公司

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蛋白质印迹（Western Blot）保姆级教程 Part1：实验方案

发布日期：2025-05-26

编辑：市场部

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蛋白质免疫印迹（Western Blot）是利用抗原与抗体特异性结合的特点，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白。

我们的Western Blot实验方案包含蛋白提取、电泳、转膜、封闭、孵育抗体、检测（图1）及所涉及的试剂，为您的WB实验保驾护航。

Western Blot实验步骤.png

图1、Western Blot实验步骤

► 蛋白提取

1、使用Trident Extraction Kits从样本（细胞或组织）中提取蛋白。

（注：根据蛋白与抗体的具体情况优化细胞数量以及上样量）

2、蛋白浓度定量，在-20℃或更低温度下冷冻保存。

3、在样品中加入Trident Sample Buffer，100℃煮沸5mins，使蛋白质变性；瞬时离心上样。

（注：必要时，使用前在Trident Sample Buffer加入二硫苏糖醇（DTT）或/3-巯基乙醇（2-ME））

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货号	名称	规格
GTX400005	Trident RIPA Lysis Buffer	100 ml
GTX400033	Trident RIPA Lysis Buffer (Low SOS)	250 ml
GTX00835	Trident High-Efficiency Exosome Precipitation Reagent	20 ml
GTX16357	Trident 6x Laemmli SOS Sample Buffer	25 ml

► SDS-PAGE电泳、转膜

1、将30 µg蛋白或 100 ng纯化蛋白装入SDS-PAGE凝胶孔中。

在SDS-PAGE凝胶孔中加入适量的Trident Blue Prestained Protein Ladder (GTX16376) 或 Trident Prestained Protein Ladder（高范围：GTX50875 或标准范围：GTX49384）装入1个或多个额外的泳道中。

2、使用1x Running buffer以50-100 V的电压运行1-2小时。建议将电压调低并延长时间。可使条带更清晰，分辨率更高。

3、在Transfer buffer中将凝胶中的蛋白质转移到硝酸纤维素膜或甲醇漂洗过的PVDF膜上。

（可选：在进行下一步之前，通过 Ponceau Red染色确认蛋白质转移成功）

相关产品

货号	名称	规格
GTX16370	Trident 20% SOS (w/v)	500 ml
GTX50875	Trident Prestained Protein Ladder (High Range)	500 µI
GTX49384	Trident Prestained Protein Ladder (Standard Range)	500 µI
GTX16376	Trident Blue Prestained Protein Ladder	500 µI

SDS-PAGE电泳.png

► 封闭、孵育抗体、洗膜

1. 封闭：在3%脱脂牛奶/PBST或Trident Universal Protein Blocking Reagent（GTX30963）中封闭30-60分钟。

2. 一抗孵育：将膜置于含适当稀释一抗的1%脱脂牛奶/PBST或Trident Universal Protein Blocking Reagent（GTX30963）中，在RT下孵育两小时或在4°C下过夜。

3. 洗膜：1x PBST ，一次10分钟，两次5分钟。

4. 二抗孵育：将膜置于含适当稀释二抗的1%脱脂奶/PBST 或Trident Universal Protein Blocking Reagent（GTX30963）中孵育1小时。

5. 洗膜：1x PBST ，三次，每次10分钟。

（注：Trident Universal Protein Blocking Reagent不含任何动物血清，适用于WB、ELISA、IHC和ICC/IF实验）

相关产品

货号	名称	规格
GTX30963	Trident Universal Protein Blocking Reagent (animal serum-free)	100 ml
GTX30977	Trident 10x PBST	100 ml
GTX30976	Trident 10x TBST	100 ml
GTX213110-01	Goat Anti-Rabbit lgG antibody (HRP)	1 ml
GTX213111-01	Goat Anti-Mouse lgG antibody (HRP)	1 ml
GTX224125-01	Rabbit Anti-Rat lgG antibody (HRP)	1 ml
GTX224126-01	Rabbit Anti-Chicken lgY antibody (HRP)	1 ml
GTX232040-01	Donkey Anti-Goat lgG antibody (HRP)	1 ml
GTX221666-01	EasyBlot anti Rabbit lgG (HRP)	250 µI , 50 µI
GTX221667-01	EasyBlot anti Mouse lgG (HRP)	250 µI , 50 µI
GTX628474-01	EasyBlot anti Rat lgG (HRP)	250 µI , 50 µI
GTX628547-01	EasyBlot anti Goat lgG (HRP)	250 µI , 50 µI
GTX628906-01	EasyBlot anti Sheep lgG (HRP)	250 µI , 50 µI

封闭.png

► 基于ECL成像

按照Trident plus Western HRP Substrate（GTX400006）或Trident femto Western HRP Substrate（GTX14698）来检测信号。

货号	名称	规格
GTX400006	Trident plus Western HRP Substrate	500 ml
GTX17435	Trident pico Western HRP Substrate	100/500 ml
GTX14698	Trident femto Western HRP Substrate	100/200 ml