Epicypher的CUTANA™ Fiber-seq试剂盒上线啦!
Epicypher的CUTANA™ Fiber-seq试剂盒上线啦!
细胞如何精确掌控基因的表达时空?其核心机制在于调控蛋白间错综复杂的相互作用——这些蛋白协同决定了染色质的可及性与三维构象。这套精密的调控网络不仅塑造了细胞的身份特征,也维系着基因组的稳定;一旦紊乱,便会诱发多种疾病。值得注意的是,基因调控主要作用于单个线性染色质分子层面,因此要绘制完整的染色质调控图谱,亟需一种能在高分辨率下同步捕获多重染色质特征的技术,Fiber-seq正是为实现这一愿景而诞生的创新方法。
什么是 Fiber-seq?
2020年, 华盛顿大学研究团队在“Single-molecule regulatory architectures captured by chromatin fiber sequencing” 一文中发表突破性成果, 正式推出Fiber-seq技术。该方法依托第三代测序平台-PacBio HiFi, 可在核苷酸分辨率上解析长达数千碱基的染色质纤维初级结构。
Fiber-seq 的核心优势在于能够从单条染色质纤维同步获取遗传与表观遗传图谱。其策略是利用甲基转移酶Hia5对开放染色质区域的腺嘌呤进行甲基化, 生成N⁶-甲基腺嘌呤 (6mA) 标记, 从而将染色质可及性信息“ 印刻 ”(stencil) 到DNA分子上。随后,通过Pacific Biosciences® (PacBio®) HiFi或Oxford Nanopore Technologies® (ONT) 等长读长测序技术, 可在单个DNA分子上并行检测这些人工引入的6mA标记与内源性DNA甲基化修饰, 实现真正的单分子多组学分析
Fiber-seq的工作流程
Fiber-seq 的工作流程简单且可扩展(见下图):

● 标记开放染色质:提取细胞核, 并与 CUTANA™ Hia5 短暂孵育10分钟。该酶会对可接近的腺嘌呤进行甲基化, 生成 N6-甲基腺嘌呤(6mA)。
● 建库与测序:使用标准的长读长文库制备方法, 对基因组DNA进行纯化和建库, 适用于 PacBio 或 Nanopore 测序平台。
● 分析长读长测序数据:长读长测序平台能够同时检测 “ 标记 ”(stenciled) 的甲基化信号和内源性DNA甲基化, 从而生成单分子水平的染色质特征图谱。研究人员还可将数据汇总, 进行群体水平的分析。
Fiber-seq 结果案例

● 图例所示为:CUTANA™ Fiber-seq 在人白血病细胞(K562)中同时检测开放染色质(以N⁶-甲基腺嘌呤,即6mA标记)和DNA甲基化(5mC)。该图将Fiber-seq结果与ATAC-seq及CTCF CUT&RUN数据进行了比较。CTCF是一种结合DNA的蛋白,可调控染色质结构,通常富集于开放染色质区域。Fiber-seq图谱中的每条水平线代表一条长读长序列,展示了来自60条独立染色质纤维的单DNA分子数据。
Epicypher的CUTANA™Fiber-seq试剂盒可以提供什么?
Fiber-seq技术为染色质生物学、表观基因组学及疾病机制研究开辟了全新视角,应用前景广阔。为推动该技术的普及应用,Epicypher与PacBio合作,凭借其在表观遗传学领域的深厚积淀,已将CUTANA™ Hia5酶(货号: 15-1032-8rxn,15-1032-24rxn)商业化,并全新推出CUTANA™ Fiber-seq试剂盒(货号: 14-2001-8rxn,14-2001-24rxn)。该试剂盒包含从细胞出发、直至获得可用于文库构建的纯化DNA所需的全部关键试剂:
ltem | Cat. No. |
CUTANATM Hia5 For Fiber-seg | 15-1032 |
CUTANATM Fiber-seq Kit SAM | 21-1034 |
CUTANATM Fiber-seq Kit Pre-1X Reaction Buffer | 21-1033 |
CUTANATM Pre-Nuclei Extraction Buffer | 21-1021 |
1 M Spermidine | 21-1005 |
Proteinase K | 15-1033 |
RNase A | 15-1034 |
gDNA Spin Columns | 10-0016 |
gDNA Collection Tubes | 10-0017 |
gDNA Cell Lysis Buffer | 21-1029 |
gDNA Binding Buffer | 21-1030 |
gDNA Wash Buffer | 21-1031 |
gDNA Elution Buffer | 21-1032 |
推荐的Fiber-seq起始样本量为:每反应使用1,000,000个原代人细胞核。该试剂盒已成功应用于冻存细胞核及轻度交联的细胞核(有关最新操作建议, 请参阅技术支持中心)。
Epicypher CUTANA™ Fiber-seq试剂盒的主要优势:
● 单次检测,多组学洞察:Fiber-seq 可在一次实验中同时分析染色质可及性、DNA甲基化和遗传变异,将通常需要三种或更多独立实验才能获得的信息整合到一次长读长测序(long-read sequencing,LRS)实验中。
● 完整解决方案:该试剂盒包含从细胞出发、直至获得可用于文库构建的纯化DNA所需的全部关键试剂。
● 用户友好资源:配套的《用户手册》可以提供详细实验流程、质量控制(QC)要点、常见问题解答(FAQ)以及专家建议,助您快速上手;此外,经过实验验证的《快速启动卡》(Quick-Start Card)以简洁格式呈现操作步骤,便于实验台旁随时查阅。 (需要这些资源的友友们可以联系Epicypher一级代理商欣博盛生物)。
● 轻松整合工作流程:Fiber-seq 可在常规长读长测序文库制备前直接进行,整个流程耗时不到2小时,并且所用试剂均经过验证,与主流LRS平台(如 PacBio 和 Oxford Nanopore)的文库制备试剂盒兼容。
● 搭载 Hia5 6mA 甲基转移酶:Hia5 是目前活性最高的 6mA 甲基转移酶,为 CUTANA Fiber-seq 试剂盒独家使用。这种高活性酶可显著缩短孵育时间,从而实现更高分辨率的蛋白质足迹检测。
严格的质量控制:每一批次产品均经过严格的质控检测,确保各组分在您的研究中提供稳定一致的结果。
Fiber-seq是一项突破性技术, 能够在单条染色质纤维水平上同步绘制遗传与表观遗传特征图谱。仅需一次实验, 即可获得原本需整合ATAC-seq、ChIP-seq和亚硫酸氢盐测序等多种方法数据才能实现的深度洞察。Epicypher的CUTANA™ Fiber-seq试剂盒提供的试剂可支持从细胞直接制备出适用于Pacific Biosciences®(PacBio®HiFi测序) 或 Oxford Nanopore Technologies®(ONT®纳米孔测序)文库构建流程的纯化基因组DNA。
Epicypher CUTANA™ Fiber-seq 试剂盒已全新上线 , 期待与您共创未来 !

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