深圳欣博盛生物科技有限公司

炎症小体（Inflammasomes）作为一种多蛋白复合物，参与生理性和病理性炎症反应，其激活机制的研究是当前免疫与疾病领域的核心方向。Adipogen针对炎症小体研究需求，提供覆盖炎症小体关键成分的经KO验证抗体。在炎症小体研究中，免疫印迹法检测caspase-1是检测炎症小体激活情况的金标准方法，但该方法也存在一定的技术难点，尤其在蛋白沉淀、蛋白分离和转膜方案的选择上。为助力您高效开展实验，Adipogen建议您参考如下protocol与tips进行操作。

AG-20B-0042-C100：anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1)

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请见 https://adipogen.com/ag-20b-0042-anti-caspase-1-p20-mouse-mab-casper-1.html

不同实验类型参考方法

相关应用参考文献官网

请见 https://adipogen.com/inflammasomes#6

Western Blot注意事项

请见 https://www.kdocs.cn/l/cudquPdvt7Zw

中文注意事项（仅供参考，如有与英文不符的地方，请以英文为准）：

• 启动与激活：具体的启动和激活步骤请按照厂家提供的protocol进行。

• 样本准备：活化的caspase-1的p20/p10片段在细胞裂解后会被释放至胞外，为了检测上清液中的caspase-1片段，建议通过沉淀法对样品进行浓缩，且不要使用含有胎牛血清的培养基，具体可见https://adipogen.com/media/wysiwyg/Protocols/Chapter_9.pdf。

• 电泳与转膜：

- 建议使用MES-SDS缓冲液替代常用的MOPS-SDS缓冲液，因其更适用于小分子蛋白质；

- 避免预染蛋白Marker位置不准，pH 会改变部分预染蛋白Marker的迁移行为，预染Marker通常是在Tris-甘氨酸凝胶（pH=9.5）中校准过迁移速率，因此建议在电泳前确认Marker与所用缓冲液的兼容性，或使用未染色蛋白Marker以准确判断目标蛋白分子量；

- 转膜采用湿转或半干转；

- 转膜缓冲液使用乙醇进行配制：若采用传统间接胶片曝光法显影，使用 96% 变性乙醇；若使用红外成像系统法，使用无水乙醇。

AG-20B-0048-C100：anti-Caspase-1 (p20) (human), mAb (Bally-1)

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不同实验类型参考方法

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请见 https://adipogen.com/inflammasomes#6

Western Blot注意事项

请见 https://www.kdocs.cn/l/cudquPdvt7Zw

中文注意事项（仅供参考，如有与英文不符的地方，请以英文为准）同产品AG-20B-0042-C100：anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1)。

AG-20B-0014-C100：anti-NLRP3/NALP3, mAb (Cryo-2)

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不同实验类型参考方法

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请见 https://adipogen.com/inflammasomes#6

Western Blot注意事项

请见 https://www.kdocs.cn/l/cebfdtmJjKct

中文注意事项（仅供参考，如有与英文不符的地方，请以英文为准）：

• 启动与激活：NLRP3 的含量通常很低，需要保证组织或细胞中应含有足够的 NLRP3，因此启动和激活步骤对于成功进行实验至关重要。具体的启动和激活步骤请按照厂家提供的protocol进行。

• 电泳与转膜：用抗体检测到的主要条带约在 110kDa 处。对于分子量大于 100kDa 的高分子量蛋白质，确保所有 NLRP3 都已转移至关重要。

- SDS-PAGE浓度小于8%且每个泳道至少上样20-30μg；

- 所有的缓冲液都应现配现用；

- 转膜缓冲液中使用15-20%甲醇（PVDF除外）；

- 在转膜之前，不要让凝胶在转膜缓冲液中放置很长时间；

- 转膜在湿转仪中进行，条件为 4℃、20V 电压，过夜转膜（转膜时间不得短于1小时且不建议使用干转仪或半干转仪）。

AG-25B-0006-C100：anti-Asc, pAb (AL177)

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不同实验类型参考方法

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免疫荧光注意事项

请见 https://adipogen.com/media/wysiwyg/Protocols/Chapter_9_NLR.pdf

中文注意事项部分内容（仅供参考，如有与英文不符的地方，请以英文为准）：

- 由于炎症小体活化导致细胞死亡，细胞经常与平板分离，若在孔板中进行IF实验，细胞会在洗涤步骤中被冲走，留下很少的细胞用于成像。通过在板上预涂聚L -赖氨酸或小鼠IV型胶原蛋白，并用无菌注射用水清洗培养皿，使其完全干燥后再接种细胞。

- 固定步骤使用的甲醛溶液现配现用，随着时间的推移，甲醛氧化成甲酸。

AG-20B-0010-C100：anti-ZBP1, mAb (Zippy-1)

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AG-20B-0020-C100：anti-Polyglutamylation Modification, mAb (GT335)

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请见 https://adipogen.com/ag-20b-0020-anti-polyglutamylation-modification-mab-gt335.html

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抗体使用注意事项

请见 https://adipogen.com/ag-20b-0020-anti-polyglutamylation-modification-mab-gt335.html 
中文注意事项（仅供参考，如有与英文不符的地方，请以英文为准，英文请见上述链接“Other Product Data”）：

(1) 由于蛋白多聚谷氨酸化修饰尚无已知的共有修饰位点，因此该抗体检测不具有序列特异性；但需注意，修饰位点需处于酸性环境中（该条件为检测必要条件）。
(2) 抗体使用浓度过高，会在免疫荧光实验中掩盖其特异性。

更多通用Tips & Troubleshooting请见 https://adipogen.com/07-support-tips-troubleshooting

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