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——从品系选择到乳剂制备的全方位指南

胶原诱导的关节炎模型(Collagen-Induced Arthritis，简称CIA)是研究类风湿关节炎(RA)致病机制和评估抗炎药物疗效的经典动物模型。该模型具有高度可重复性，但要成功诱导高发病率和高严重程度的关节炎，需严格把控从品系、材料到操作的每一个关键环节。Chondrex提供了一整套高质量、专业化的CIA模型解决方案，助您轻松跨越CIA模型建立的所有障碍。

一．实验动物选择与饲养
小鼠品系

(1) DBA/1

• 特点：对CIA高度易感，发病率可达90-100%。

• 胶原匹配：对鸡、牛、猪II型胶原均有免疫应答。

(2) C57BL/6

• 特点：传统上被视为CIA抵抗品系，但通过优化免疫方案可获得50-70% 的发病率。

• 胶原匹配：只对鸡的二型胶原蛋白有免疫反应。

(注：即使品系相同，不同供应商的小鼠也可能会造成实验结果的差异，建议开展正式实验前先进行小规模测试。)

周龄与饲养条件

- 建议使用具有成熟免疫系统的7-8周龄小鼠；
- 建议在SPF级条件下饲养；
- 建议饲喂高脂饲料(可提高关节炎发病率)。

二. 产品推荐

与大鼠不同，小鼠需使用含结核分枝杆菌的完全弗氏佐剂(CFA)才能诱导关节炎。Chondrex提供精确浓度的CFA，避免自行配制带来的误差。

三. 关节炎诱发实验方案

根据品系和实验需求，可选择单次免疫(DBA/1)方案或加强免疫(C57BL/6)方案。

(1) 单次免疫(无需加强免疫，适用于DBA/1品系小鼠)

• Day 0：尾根部皮下注射胶原和CFA (4mg/ml) 配成的0.1ml乳剂(1:1混合)

• Day 0-28：每7天对关节炎评分

• Day 28-56：每2-3天对关节炎评分，关节炎发病率90-100%

• Day 56：实验结束

(2) 加强免疫

- 针对DBA/1品系(为避免高浓度的结核杆菌引起免疫部位严重的炎症反应可选用方案)：

• Day 0：尾根部皮下注射胶原和CFA (1mg/ml) 配成的0.1ml乳剂(1:1混合)

• Day 0-28：每7天对关节炎评分。其中Day 21加强注射胶原和IFA配成的0.1ml乳剂

• Day 28-56：每2-3天对关节炎评分，关节炎发病率90-100%

• Day 56：实验结束

- 针对C57BL/6品系：

• Day 0：尾根部皮下注射胶原和CFA (5mg/ml) 配成的0.1ml乳剂(1:1混合)

• Day 0-28：每7天对关节炎评分。其中Day 21加强注射胶原和CFA (5mg/ml) 配成的0.1ml乳剂(1:1混合)

• Day 28-56：每2-3天对关节炎评分，关节炎发病率50-70%

• Day 56：实验结束

四．关键技术要点与注意事项
1. 乳剂制备

乳剂不稳定是导致造模失败最常见的原因。推荐使用电动高速搅拌器进行乳化，不推荐双注射器或超声波处理的方法。

(1) 准备实验材料：高速分散机刀头 (图1a)、带三通旋塞阀的10 mL管 (图1b)和1 mL玻璃注射器 (图1c)。

图1

(2) 锁闭三通阀。
(3) 将整个装置置于冰上预冷，以防搅拌过程中发热引起蛋白变性(图 2)。

图2

(4) 向注射器内加入CFA(或加强免疫时使用的IFA)，体积最多不超过注射器的25%。
(5) 边低速搅拌(1000-3000 rpm)边缓慢逐滴加入等体积胶原溶液(图 3)。

图3

(6) 在10000–30000 rpm条件下混匀2分钟，对于大体积乳剂制作(2-5ml)为了使乳液混合均匀，建议混匀过程中上下移动注射器，确保剪切均匀。
(7) 停止操作，将装置重新置于冰上冷却5分钟。
(8) 第(6)-(7)步骤的高速混匀和冷却可以重复2-3次，以产生稳定的乳液。
(9) 乳剂质量鉴定(滴液试验)：用针头替换三通阀，在装有冰水的烧杯中滴一滴乳剂。如图4所示，如果乳剂在水中成团不散开，则乳剂为稳定的；如果乳剂在水中散开，则表明乳剂不稳定，可再加入一滴或几滴佐剂，重新混合并再次测试。
(注：建议在乳剂制备完成后立即进行注射；如需暂存，需将其存放于4℃，且不超过3小时。)

图4

(10) 使用注射器吸取最终形成的乳剂，准备注射。

2. 免疫注射乳剂

(1) 装置(如图5)
a. 玻璃注射器(含乳剂，严禁有气泡，可通过用力甩注射器将乳剂中的气泡赶出)
b. 针头(25号或者27号，长度5/8英寸)
c. 固定小鼠装置

图5

(2) 注射部位与操作

如图6所示，从尾根部2cm处将针头插入皮下，针头沿斜向上与鼠尾方向平行推进，直至针尖插入位置距尾根部0.5cm。加强免疫时应避开初始注射部位，选择尾根部3cm处进针，针尖插入皮下距尾根部1.5cm。每次注射前充分擦拭针头，防止乳液渗漏。
(注: 不要背部皮下或腹腔或静脉注射乳剂，以免引起腹腔或胸腔严重的炎症反应。)

图6

五．关节炎评估

A. 临床评分

有效的免疫注射后，临床上明显的关节肿胀症状会在3-5周出现。可通过临床评分进行定性评估或使用测厚仪测量爪子厚度来评估。关节炎炎症程度的临床评分如下：

B. 血清分析

高浓度抗II型胶原蛋白IgG抗体的产生是诱发关节炎的关键。其中II型胶原蛋白IgG2a和IgG2b抗体亚型对激活补体及随后的关节炎的发生至关重要。Chondrex提供小鼠胶原IgG及其各亚型抗体的ELISA试剂盒，可精准定量血清中自身抗体水平，为CIA模型评价提供可靠工具。

更多详细实验步骤，请参考：

Mouse-CIA-Protocol：https://www.chondrex.com/documents/Mouse-CIA-.pdf

Mouse-CIA-Visual-Guide:https://www.chondrex.com/documents/Mouse-CIA-Visual-Guide.pdf

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