硫磺素T:淀粉样蛋白(α-syn、Tau、Aβ)研究的关键工具

硫磺素T (Thioflavin T,ThT) 是一种苯并噻唑盐类的阳离子荧光染料。它最初在纺织业中用作染料,后因其在生命科学与医学研究中的独特价值而备受关注——作为一种高度特异性的荧光探针,ThT可在与淀粉样蛋白原纤维结合后荧光增强。因而常被用于检测堆叠的β折叠聚集体。
ThT的工作原理基于其与淀粉蛋白原纤维结合后荧光特性的显著变化。
● 游离状态 (未结合):
• 在水溶液中自由存在的ThT分子,其荧光非常微弱,量子产率很低。
• 最大激发/发射波长:约为~385nm/~445nm
● 结合状态 (与淀粉样原纤维结合):
• 当ThT与富含β-折叠 (cross-β-sheet) 结构的淀粉样纤维结合时,其分子内旋转受到限制,从非辐射衰变转变为辐射衰变。
• 这一过程导致其荧光强度急剧增强(通常可达100-1000倍),并且其最大发射波长发生红移。
• 结合后的最大激发/发射波长:通常为~450nm/~482nm。
这种荧光强度的巨大变化与淀粉样原纤维的数量成正比,从而实现了对纤维化过程的实时、定量监测。
• 产品货号:32553
• Cas No.:2390-54-7
• 分子式: C17H19N2S•Cl
• 分子量: 318.9
• 纯度: ≥90%
• 发射波长: 445, 482 nm 激发波长: 385, 450nm
• 产品形式: 晶体状固体
• 溶解度: DMF: 1mg/ml DMSO: 1mg/ml Ethanol: 1mg/ml PBS (pH 7.2): 轻微溶解
• Ethanol: PBS (pH 7.2) (1:3): 0.3mg/ml
• λmax: 417nm
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| Thioflavin T | 32553 | 10g/25g/50g/100g |
具体步骤如下:
1️⃣. 使用dH2O制备1mM的硫黄素T储备液 (需现配现用,并用2µm注射式过滤器过滤);
2️⃣. 使用pH7.4的PBS对硫磺素T储备液进行稀释,最终浓度为25µM(每孔体积100µL);
3️⃣. 室温下解冻α-突触核蛋白/Tau蛋白样品;
4️⃣. 将10μM α-突触核蛋白/Tau蛋白原纤维或100μM单体(或两者混合)加入到合适的板孔中。用移液器上下混合均匀。
注:该浓度是估计值,具体实验需要进行优化以获得较理想的实验结果,且不会造成样本的浪费。
5️⃣. 对板孔进行密封并放置于震荡孵育器上(800rpm),温度为37℃;
6️⃣. 使用全波长荧光型酶标仪读取荧光读数。
7️⃣. 再次将孔板密封放置于震荡孵育器上, 温度为37℃。
8️⃣. 在1到72小时之间的固定间隔进行读值。
• 温度:37°C
• 读取类型:全孔扫描
• 波长:发射波长450nm 激发波长485nm
• PMT Gain:自动
• 每次读取闪烁:6
• 震动:读数前 20秒
注:以上操作步骤引自StressMarq品牌官网上对α-突触核蛋白及Tau蛋白硫磺素T检测。厂家原网址链接为:Alpha Synuclein Thioflavin T Assay Protocol | StressMarq
StressMarq 公司介绍
StressMarq Biosciences成立于2007年, 总部位于加拿大维多利亚市, 是一家专业的生物试剂供应商。其在开发和商业化一系列预制原纤维、寡聚体和单体蛋白方面处于领先地位, 这些蛋白对于神经退行性疾病(阿尔茨海默病、帕金森病等)的研究至关重要, 包括:α-突触核蛋白(alpha synuclein)、Tau蛋白、β淀粉样蛋白(amyloid beta)和超氧化物歧化酶1(SOD1)等。StressMarq的产品范围还涵盖多种抗体、试剂盒、小分子以及其他类型蛋白质。这些产品被广泛应用于神经科学、癌症研究及细胞信号传导等多个生命科学领域,为各类科学研究提供了全面支持。
● 蛋白:专注于开发与神经退行性疾病密切相关的特色产品,涵盖α-突触核蛋白、Tau蛋白和β-淀粉样蛋白的预制原纤维、寡聚体及单体结构
● 抗体:数百种与细胞信号传导、神经科学、癌症和心血管系统相关的高品质单克隆和多克隆抗体
● 试剂盒:涉及细胞信号和氧化应激等领域,如DNA Damage (8-OHdG) ELISA Kit
● 小分子:涉及癌症和神经科学领域300余种抑制剂、拮抗剂、激动剂、激活剂和配体
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