深圳欣博盛生物科技有限公司

原因

解决方案

试剂未平衡至室温

● 实验开始前，将试剂盒从冰箱取出平衡至室温

检测体积偏小

● 确保取液时，正确使用移液器
  ● 检查移液器吸液管道是否阻塞
  ● 校正移液器

孵育时间过短

● 使用计时器，准确孵育时间

底物受污染

● 使用新配制的试剂，重新实验

包装袋中有湿气

● 检查袋中是否有干燥剂
  ● 封好未使用的孔条
  ● 首次开袋时，应标上日期

样本中有抑制剂

● 叠氮钠会抑制 HRP 酶的活性

洗涤步骤过于剧烈

● 降低洗涤系统的压力

试剂在使用前未混匀

● 使用前务必混匀试剂

实验开始前, 微孔变干燥

● 实验过程勿中断，需连续完成所有实验步骤

未加终止液

● 加入终止液，增强颜色反应的强度，稳定最终的颜色反应

结合物工作液浓度偏低

● 准确稀释制备工作液，按说明书建议操作

读数时使用的滤光片不正确

● 使用 TMB 底物时，450nm 波长下读数，650nm 波长下读取校正读数

标准曲线良好但样本无检测信号

原因

解决方案

样本中无待检物

● 设置对照，重新实验

样本中其他物质影响或掩盖检测

● 作适当稀释，降低其他物质干扰或作系列稀释 , 检测回收率

样本中检测物过高 , Hook 效应导致假阴性

● 适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在检测试剂盒检测范围内

假阳性反应

原因

解决方案

洗涤不充分

● 使用前须检查洗板机是否正常工作

洗板机管道阻塞

● 须经常维护洗板机

微孔板受酶结合物污染
  加结合物时 , 洒在微孔边缘
  结合物污染了底物溶液

● 小心向微孔加入结合物，加入微孔底部中央，避免与孔壁和边缘接触

检测样本中含有红细胞

● 离心

微孔中液体挥发

● 用封板胶密封反应孔 , 置于湿盒内

结合物工作液浓度过高

● 按说明书稀释

孵育温度过高

● 降低温度

重复性较差

原因

解决方案

微孔中有小气泡

● 用针尖挠破气泡

分液误差

● 检查分液装置

试剂未混匀

● 确保充分混匀试剂

洗涤不充分

● 确保所有微孔都抽吸干净，并及时填满微孔

微孔被吸头划破

● 洗液或注液时，小心操作

样本中有杂质或沉淀物

● 使用前须离心

孵育温度不稳定

● 在温度稳定的孵育箱中进行孵育

使用了用过的封板胶纸

● 每次须使用新的封板胶纸封闭反应孔

高背景或阴性对照值偏高

原因

解决方案

阴性对照孔被阳性对照或样本污染

● 洗涤时，勿将洗液溢出板孔外
  ● 确保洗涤时每个孔都充满缓冲液，洗涤后确保将残余液体从孔中移除
  ● 在微孔中央吸取样本或试剂时，避免枪头与内壁或边缘接触
  ● 重新洗涤

抗体非特异性结合

● 封闭液不适合，更换封闭液
  ● 预处理微孔以防止抗体非特异性结合

酶结合物浓度过高

● 检查浓缩酶结合物是否按照说明书要求正确稀释

孵育温度过高

● 抗体在适当温度下具有最适结合活性，确保孵育在说明书指定温度下进行

缓冲液被污染

● 准备新的缓冲液，进行灭菌过滤

孵育时间过长

● 按说明书规定时间孵育，或缩短孵育的时间

底物在使用前曝光

● 应避光保存于暗处

读板前停留时间过长

● 加终止液后 3 分钟内读数

读数时使用的滤光片不正确

● 检查滤光片， TMB 底物推荐在 450nm 下读数

未加入终止液

● 如底物反应未终止，颜色会继续生成

标准曲线不佳

原因

解决方案

倍比系列稀释标准品时，未混匀

● 加入标准品和稀释液后，须混匀

过早稀释

● 在刚要使用时，准备试剂立即加入微孔

洗涤不充分

● 确保所有微孔都抽吸干净，并及时填满微孔

读数时间超出了显色所需时间

● 读数时间在说明书推荐的时间内，注意观察颜色变化

体积不正确

● 校正移液器

移液器使用不当

● 快速等量地将吸液管中的液体分配到各微孔中，使用校正过的移液器

整块板产生阳性 OD 值或整个板显蓝色

原因

解决方案

洗涤液体积不足或底物被残留于孔低的结合物所污染

● 洗涤时，缓冲液充满至孔边缘，但要确保不能溢出孔外

结合物浓度过高

● 检查是否按照说明书推荐比例稀释

血清中有血清因子

● 勿加热血清

底物容器不洁净

● 用酸清洗容器瓶，用蒸馏水冲洗

底物孵育时，微孔板曝光

● 加底物时，立即将板置于暗处

整块板 OD 值偏低

原因

解决方案

显色时间不足

● 适当延长显色时间

孵育温度偏低

● 36 度为最适反应温度 ( 欣博盛 ELISA 试剂盒 )

未加终止液

● 加入终止液，增强颜色反应的强度，稳定最终的颜色反应

部分原因也可参考【阳性对照偏低或低吸光度】

显色缓慢

原因

解决方案

样本未置于室温

● 实验开始前，将样本平衡至室温

酶结合物活性减弱

● 检测稀释度

酶活性受到抑制如叠氮钠

● 避免使用不当的防腐剂

显色温度不适当

● 按说明书操作

边缘效应

原因

解决方案

蒸发

● 各操作步骤间，须使用封板胶密封反应板

温度不均匀

● 在孵育时，将板放于 36 ℃孵育箱中，避免温度波动。勿叠放反应板防止受热不均